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OALib Journal期刊
ISSN: 2333-9721
费用：99美元
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ⅰ、ⅲ型前胶原基因第2外显子核酶对靶rna的体外切割活性的研究
, PP. 653-655
Keywords: 前胶原基因,核酶,体外活性,成纤维细胞,瘢痕
Abstract:
目的体外研究锤头型α1ⅰ型及ⅲ型前胶原基因第2外显子片段核酶对各自靶rna分子的切割活性及反应条件。同时观察两反义核酶对瘢痕中成纤维细胞胶原合成的影响。方法将含α1ⅰ型及ⅲ型前胶原基因第2外显子片段的重组质粒(pt-ⅰ、pt-ⅲ),经体外32p标记转录后形成产物靶rna。同时将含特异性核酶基因的重组质粒(pt-gⅰ、pt-gⅲ)进行非标记的体外转录,产物(核酶)与各自的32p-靶rna按不同的条件混和反应,电泳后放射自显影观察结果。将构建好的核酶以脂质体包裹后导入培养的成纤维细胞内,采用图像分析法观察核酶对成纤维细胞ⅰ型、ⅲ型胶原蛋白mrna合成的影响。结果两种核酶在37℃、42℃均能有效切割各自的靶rna,对mg2+浓度的要求范围较宽(10~20mmol/l);反应温度从65℃逐渐降至并维持在37℃的条件下核酶切割活性显著提高。ⅰ、ⅲ型胶原蛋白mrna的表达明显降低,胶原蛋白生成降低,胶原生成明显受抑制。结论针对α1ⅰ型及ⅲ型前胶原基因第2外显子片段的核酶能有效地在体外对靶rna进行切割并能有效地抑制瘢痕中成纤维细胞胶原的合成。
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