实时荧光定量pcr检测外周血trec的方法研究

目的建立及优化检测移植后患者外周血trec拷贝数的实时荧光定量pcr(fq-pcr)的方法及实验影响条件,为临床研究造血干细胞移植的免疫功能重建机制提供方法学基础。方法在abi7000pcr仪上实时扩增检测构建的trec质粒标准品,摸索最佳扩增条件及建立标准曲线,然后用优化的fq-pcr方法检测临床样本。结果t3、t4引物和r3、r4引物的扩增效率分别优于t1、t2引物和r1、r2引物。taqman-mgb探针比普通的taqman探针扩增效率高。金牌热启动taq酶,比较普通taq酶而言,提高了pcr的特异性和敏感性。fq-pcr的反应条件设定:95℃10min后95℃5s,53℃30s,40循环结束。结论通过摸索与优化实验条件,建立了实时荧光定量pcr检测外周血单个核细胞中trec的方法。?