pcr介导嗜肺军团菌疫苗候选基因lvga和hsp60的融合及其在大肠杆菌中表达的初步研究

目的采用pcr法进行嗜肺军团菌lvga和hsp60二基因的拼接融合,克隆并检测该融合基因在原核系统中表达情况,为进一步研究其免疫性能作必要的准备。方法采用重组聚合酶链反应,设计引物首先分别从嗜肺军团菌基因组dna中扩得待融合端互补的军团菌毒力基因(lvga)和热休克蛋白60基因(hsp60),经琼脂糖电泳纯化回收,再以适量lvga和hsp60为模板变性、退火、重叠延伸,实现二基因的pcr水平融合,随后采用外引物进行新一轮扩增,扩得足量lvga/hsp60融合基因的pcr产物,继而将其定向克隆至原核表达载体pgex-4t-1,构建原核表达重组质粒,转化宿主菌bl21,经pcr、酶切及测序鉴定后,iptg诱导表达,产物进行sds-page电泳、免疫印迹分析等鉴定。结果扩增出了约2292bp的lvga/hsp60融合基因,构建了原核表达重组质粒pglvga/hsp60,并检测到mr约117000的gst-lvga-hsp60融合蛋白表达条带。结论采用pcr法实现了嗜肺军团菌lvga和hsp60二基因的融合,构建了其原核表达重组质粒,并使该融合蛋白在原核系统中得到了有效的表达,为进一步研究该融合基因的免疫学特性奠定了基础.