基于pcr的sirna表达框的制备

目的改进目前基于pcr的方法制备sirna表达框,转染细胞后产生高效的rna干扰作用。方法从k562细胞中提取基因组dna,以此为模板,pcr扩增u6启动子序列并克隆至pmd18-t载体中,用载体上的引物进行扩增,所得产物即制成作为扩增sirna表达框的模板。选择p53为靶基因,扩增制备sirna表达框,测序验证后,转染sh-sy5y细胞48h后提取rna进行rt-pcr,检测rna干扰的效应。结果测序结果表明所克隆的u6启动子序列正确。细胞转染表达框,在mrna水平上,p53基因的表达明显受到了抑制。结论本实验所制作的基于pcr的方法制备sirna表达框可以很好地应用于rnai作用研究。