靶向vegf的mirna对恶性黑色素细胞增殖和凋亡的影响

目的研究靶向血管内皮生长因子（vegf）基因的外源性mirna对恶性黑色素瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法根据vegf基因序列设计合成4对mirna干扰片段，构建质粒真核表达载体，分别为x-26-1-3、x-26-2n-1、x-26-3-2和x-26-4-4，测序分析鉴定插入序列的完整性；脂质体法将该4个重组表达载体转染黑色素瘤细胞株skmel-28，rt-pcr检测转染细胞中vegf基因的mrna表达变化，westernblotting检测mirna对vegf蛋白表达水平的调控效应，明确抑制效果最为显著的mirna干扰序列。mts法和流式细胞仪分别检测人工合成的靶向vegf的mirna对skmel-28生长的抑制作用，以及对肿瘤细胞凋亡的影响。结果测序分析证实4个重组体插入片段的碱基序列均完全正确，成功转染skmel-28细胞后，均能显著抑制肿瘤细胞vegfmrna和蛋白的表达，与对照组相比有显著性差异（p<0.01）。抑制效应最强的重组载体是x-26-2n-1，mts法和流式细胞仪检测显示，skmel-28细胞转染x-26-2n-1后，细胞增殖受到明显抑制，增殖抑制效应具有时间依赖性，与阴性对照组比较差异具有显著性（p<0.05），与空白组比较细胞增殖抑制更加明显（p<0.01）；肿瘤细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率也显著高于对照组（p<0.01）。结论外源性靶向vegf的mirna能够显著降低黑色素瘤细胞skmel-28vegf基因和蛋白的表达水平，抑制肿瘤细胞增殖，诱导细胞凋亡。