骨髓间充质干细胞体外培养及肝向分化方案的优化

目的优化一套简便、可靠、稳定的大鼠骨髓间充质干细胞分离、培养、鉴定及肝向分化的方案。方法采用全骨髓差速贴壁法分离提取大鼠骨髓间充质干细胞，通过优化的1.5h差速贴壁结合12h首次全量换液方法，及体外改良培养方案实现细胞高效纯化扩增。流式细胞术表面标志物检测结合成脂、成骨、成软骨诱导分化鉴定细胞群。采用添加bfgf、hgf、egf等多种生长因子的三步诱导法促使骨髓间充质干细胞向肝系分化，并进行形态学、免疫学、基因水平评估。结果分离纯化的细胞群阳性表达cd29、cd44、cd90，阴性表达cd34、cd45，经成脂、成骨、成软骨诱导液作用后，油红o、茜素红、甲苯胺蓝染色均呈阳性。经三步法肝向诱导处理后，细胞群呈肝样细胞形态改变，表达肝脏特异性标志物alb、afp，肝系相关基因表达水平呈时间依赖性逐渐上升。结论优化后的方案能够简便、可靠、稳定地获得高纯度的大鼠骨髓间充质干细胞，并能在特定微环境作用下实现肝向分化。