应用重组慢病毒表达载体建立抑癌基因wtx稳定高表达结直肠癌sw620细胞系

目的构建wtxcds区全长重组慢病毒表达载体，感染结直肠癌sw620细胞，建立wtx稳定高表达结直肠癌sw620细胞株。方法将wtx基因全长cds区插入gv287慢病毒质粒载体，重组载体与包装载体共转染人胚肾293t细胞，收集上清、浓缩得到表达wtx的重组慢病毒。慢病毒感染结直肠癌sw620细胞，荧光显微镜初步观察感染效率，g418进一步筛选得到稳定感染细胞株。qpcr及westernblotting检测wtx过表达效率。每部分均设立相应对照。结果载体片段测序结果示成功构建了wtx重组表达载体；包装病毒滴度检测适中，提示wtx表达慢病毒包装成功；慢病毒感染结直肠癌sw620细胞后，wtx基因mrna以及蛋白表达水平明显增高，有统计学意义，提示sw620结直肠癌细胞wtx高表达稳定株构建成功。结论建立慢病毒感染方法的结直肠癌sw620细胞wtx过表达稳定细胞株，为进一步研究wtx对结直肠癌发生、发展的作用机制提供分子生物学工具。