风湿性心脏病自身抗原rhdag1的获得与鉴定

摘要：目的探索用风湿性心脏病患者噬菌体表达文库构建和免疫筛选方法来研究风湿性心脏病的自身抗原候选分子。方法提取风湿性瓣膜性心脏病患者心肌组织总rna，分离纯化mrna并逆转录合成长链cdna，用噬菌体载体构建表达文库，用风湿热患者血清免疫筛选该库，对筛选获得的自身抗原基因进行鉴定、生物信息学分析、体外表达、westernblotting鉴定和免疫反应结合性分析。结果成功构建了风湿性心脏病患者心脏组织噬菌体表达文库，原始文库滴度为3.3×106pfu/ml，重组率为99%，81%外源片段大于1kb。通过免疫筛选方法获得了自身抗原rhdag1，该自身抗原与人类角蛋白18同源，能与活动性风湿热患者血清和风湿性心脏病患者血清结合，而与体检健康人血清无结合。结论构建噬菌体展示文库方法可以有效地用于筛选和获得风湿性心脏病患者自身抗原；本研究提示自身抗原rhdag1可成为风湿热和/或风心病的候选分子标志物。