鸭乙型肝炎病毒ymdd突变株体外耐药模型建立

摘要：目的构建鸭乙型肝炎病毒(dhbv)ymdd点突变的复制质粒，研究其在鸡肝癌细胞中的复制及拉米夫定抗性。方法以广东樱桃谷鸭dhbv分离株为模板，将3631bp的片段克隆至载体pbluescriptiiks(+)中，构建含1.2倍病毒全基因的重组质粒，经pcr定点突变获得ymdd突变株。将构建质粒经fugenetm6瞬时转染鸡肝癌细胞，分析变异株的复制能力及拉米夫定耐药性。结果pcr鉴定、酶切鉴定及序列测定均证实成功获得1.2倍dhbv全基因ymdd突变质粒。southern印迹杂交表明重组质粒转染细胞后可检测到病毒复制中间体；野生株的复制能力是突变株的2.7倍。拉米夫定对变异株的ic50=37.12±8.81ng/ml，高于野生株的ic50=10.90±4.80ng/ml。结论与野生株相比，ymdd突变株质粒体外复制活性减弱，对拉米夫定敏感性下降。