慢病毒介导的shrna靶向干扰nestin鼻咽癌稳定细胞株的建立

摘要：目的检测nestin基因在8种鼻咽癌细胞中的表达差异，寻找高表达的细胞株。构建nestin基因的shrna表达载体，建立nestin稳定干扰的鼻咽癌细胞株。方法应用real-timepcr和免疫荧光技术检测nestin在鼻咽癌细胞株中的表达水平。构建带gfp的重组靶向nestinshrna慢病毒表达质粒，筛选阳性克隆，测序鉴定。293t细胞包装病毒，收集病毒上清，测定滴度。经real-timepcr内源筛靶，选择最佳靶点。将重组慢病毒感染5-8f细胞，westernblotting和real-timepcr检测nestin的表达。结果在8种鼻咽癌细胞株中，5-8f细胞中nestin表达较高。pcr和测序验证重组质粒构建成功。慢病毒感染5-8f细胞后，与阴性对照组和空白组相比，nestin的mrna和蛋白水平明显受到抑制。结论成功构建了干扰nestin的慢病毒重组质粒，并建立了稳定靶向干扰nestin表达的5-8f鼻咽癌细胞株。