肽核酸钳制pcr早期检测乙型肝炎病毒ymdd耐药变异

目的建立乙型肝炎病毒肽核酸钳制pcr（pna-pcr）耐药监测方法，以提前监测乙型肝炎病毒ymdd耐药株的产生。方法选取rtm204i（att）、rtm204v（gtg）突变型质粒与野生型质粒rtm204（atg）按照不同比例混合后，用pna-pcr法及直接测序法对耐药位点进行检测，评价两种方法的灵敏度及特异性；选取临床耐药检测患者血清标本85例，采用pna-pcr法及直接测序法进行耐药检测，比较两种方法的耐药检出率。结果pna-pcr法可在105倍野生型ymdd基因背景下检测出突变，灵敏度为0.001%，可检测到最低限为101拷贝。而直接测序法可检测的基因突变的最低极限为104拷贝，检测灵敏度为10%。85例临床耐药检测患者中，pna-pcr法ymdd检测阳性率为85.9%（73/85∶yidd∶40，yvdd∶23，yidd+yvdd∶10），而pcr产物直接测序法检阳性率仅为40%（34/85∶yidd∶21，yvdd∶11，yidd+yvdd∶2）。阴性对照，两种方法均未测出hbv病毒，两种方法的特异性均较好。结论pna-pcr方法在灵敏度及特异性上均优于直接测序法，而且操作简便，快捷，在科研和临床上都有很好的应用前景。