丙型肝炎病毒5’端非编码区结构域ⅰ、ⅱ在其翻译启动活性中的作用具有细胞特异性

目的分析在不同宿主细胞的翻译体系下，缺失不同片段的hcv5’utr翻译启动活性的差异。方法以脂质体介导基因转染技术，将截短型hcv5’utr调控fluc的真核表达质粒与rluc真核表达质粒prl-tk共转染至不同的细胞中，转染后36h：①提取细胞rna，半定量rt-pcr检测目的质粒的转录水平；②用双荧光素酶报告基因检测系统检测fluc基因相对表达活性，分析hcv5’utr缺失不同结构域后在不同翻译体系中翻译启动活性的差异。结果⑴缺失5’端44个碱基的hcv5’utr的翻译启动活性分别与缺失前相比：在hela细胞和c6细胞中无明显影响，在l-02细胞中活性下降为46%，而在293t细胞则为缺失前的146%；⑵缺失5’端118个碱基后，hcv5’utr的活性分别与缺失前相比：在hela细胞中，缺失后活性仅为缺失前的49%，而在l-02细胞、c6细胞和293t细胞中，活性分别为缺失前的140%、160%和235%。在本研究使用的四种细胞中，pcnl的翻译启动活性的差异无统计学意义，pcnl-d2在293t细胞中活性最高，在l-02细胞中活性最低。pcnl-d3在293t、c6和l-2细胞中活性相近，但在hela细胞中的活性明显比其他细胞低。结论hcv5’utr的domainⅰ和domainⅱ对其翻译启动活性的影响与宿主细胞种类相关，具细胞特异性。