大鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养方法优化

目的建立一个分离、培养、纯化大鼠的骨髓间充质干细胞的方法。方法使用贴壁法分离大鼠的骨髓间充质干细胞，通过培养初期的频繁换液和传代过程中减少胰蛋白酶的暴露时间，达到骨髓间充质干细胞的纯化。流式细胞仪检测细胞表面标志物，mtt法检测细胞生长状况，暴露于不同的诱导培养基使细胞成骨、成脂，并向肝胆系分化。结果分离所得的细胞阳性表达cd29、cd44、cd90，而对于造血细胞标志物cd45呈阴性。在成骨、成脂培养基的诱导下，细胞alp、茜素红、油红o染色均呈阳性，并发现传至10代的细胞仍保持分化功能。将骨髓间充质干细胞贯续暴露于不同的细胞因子和激素，得到了表达肝细胞、胆管上皮细胞特异标志的子代细胞。结论通过改良后的方法可以高效、简洁地分离出形态均一的大鼠骨髓间充质干细胞，并能够向多胚层的细胞分化。