慢病毒介导rna干扰沉默fas基因在脐带间充质干细胞中的表达

目的应用慢病毒介导的rna干扰技术，构建fas基因的sirna慢病毒表达载体，建立fas基因稳定干扰的人脐带间充质干细胞（uc-mscs）株，为下一步使用低表达fas基因的uc-mscs治疗再生障碍性贫血奠定实验基础。方法以人fas基因mrna序列作为干扰靶点，设计4组靶向fas的shrna序列，合成寡核苷酸，与经过bamhi、ecori双酶切后的lv3载体连接获得重组慢病毒，通过感染293t细胞对慢病毒进行包装和滴度测定。体外培养人uc-mscs，使用包装好的慢病毒感染uc-mscs，应用realtime-pcr和westernblotting检测感染后细胞中fasmrna及蛋白的表达情况。结果经酶切以及基因测序鉴定证明慢病毒载体构建成功，病毒悬液滴度为3×108tu/ml。realtime-pcr和westernblotting结果显示干扰组细胞的fas表达水平较对照组显著降低。结论慢病毒介导的sirna能有效沉默uc-mscs中fas基因的表达。