基于ram-hplc在线富集技术检测大鼠血浆及尿液中的呋塞米

目的通过柱切换技术建立限进性填料柱-高效液相色谱法，实现在线直接进样并检测大鼠血浆及尿液中的呋塞米。方法以自制限进填料柱为预处理柱，lunac18柱为分析柱，预处理流动相为水-甲醇（95∶5，v/v），含体积百分数为0.1%的甲酸，流速为1ml/min；分析流动相为血浆：甲醇-水（65∶35，v/v），尿液：甲醇-水（55∶45，v/v），均含体积百分数为0.1%的甲酸，流速均为1ml/min，柱温为25℃；检测波长为274nm。结果呋塞米血浆样品在进样100μl时，富集效果良好，在0.1~3.2μg/ml的浓度范围内具有良好的线性关系（r=0.9995），尿液进样20μl，呋塞米浓度在0.5~32μg/ml范围内具有良好的线性关系（r=0.9991），血样及尿样的三个加标水平下的平均回收率分别为101.82%~113.36%，98.75%~112.27%，日内日间精密度均小于5%。结论药代动力学参数auc0→24为6.265μg/（ml？h），t1/2为2.447h，cmax为1.414μg/ml；24h内呋塞米的累积排泄率为32.50%~39.08%。本方法简单快速，适用于血浆及尿液中呋塞米的直接进样检测。