稳定过表达mir-101结直肠癌细胞株的建立及其靶基因的鉴定

目的构建稳定过表达mir-101的sw620细胞亚株并鉴定mir-101的靶基因。方法运用荧光定量pcr技术检测结直肠癌细胞株中mir-101的表达水平。利用gv209-mir101慢病毒感染sw620细胞，建立稳定过表达mir-101的细胞株。扩增包含mir-101结合位点的rac13’utr基因片段并将其亚克隆至psicheck-2载体，对此重组载体进行定点突变构建psicheck-2-rac1-mut；并用双萤光素酶报告实验检测rac13’utr相对荧光素酶活性。结果稳定过表达mir-101的细胞株中，mir-101的表达明显高于对照组。双萤光素酶报告实验证实mir-101inhibitors可以上调3’utr相对荧光素酶活性。稳定过表达mir-101，rac1表达下调；而干扰mir-101之后rac1表达上调。结论成功构建稳定过表达mir-101的sw620细胞亚株。rac1是mir-101的靶基因。