hur蛋白118位苏氨酸对热应激状态下的双特异性磷酸酶1的转录后调控

目的探讨rna结合蛋白hur118位苏氨酸对热应激状态下的双特异性磷酸酶1（dusp1）转录后调控机制。方法构建hur118位苏氨酸突变体真核表达质粒，并用脂质体转染nih3t3细胞，real-timepcr检测其对dusp1mrna水平的影响，westernblotting检测其对dusp1蛋白表达的效应。结果（1）小鼠hur不同突变体真核表达载体质粒构建成功；（2）热休克刺激后，hurt118磷酸化明显增强；（3）过表达hur(wt)与hur（t118e），经过热休克刺激后，dusp1mrna水平明显升高，其蛋白表达也有上调；过表达hur(t118e)时，dusp1的mrna水平明显上调，而蛋白水平在热休克刺激前后均上调，其表达变化无差异而过表达hur（t118a），热休克刺激前后dusp1mrna水平及蛋白表达均下调；（4）热休克刺激下，hur（wt）可以从细胞核内转位到细胞质并形成颗粒；当过表达hur（t118e）时，在静息状态下，hur（t118e）弥散分布于细胞质，热休克刺激会使其在细胞质形成明显的颗粒；而过表达hur（t118a）时，热休克刺激并不能使其移位出核。结论rna结合蛋白hur参与了dusp1的转录后调控，可以通过其118位的苏氨酸磷酸化提高热休克刺激后的dusp1的基因及蛋白水平。