hsa-mir-654-5p通过抑制骨形态发生蛋白2调控人骨髓基质干细胞成骨分化

摘要：目的明确萎缩性骨不连组织水平表达上调的hsa-mir-654-5p在人骨髓基质干细胞（hbmscs）中对其预测靶基因骨形态发生蛋白2（bmp2）mrna和蛋白的抑制作用，探索其在成骨分化过程中的生物学调控功能。方法分离培养hbmscs，将第4代hbmscs培养16h后分别按相应体系转染细胞，再培养48h后取六孔板内细胞提取总rna和总蛋白，进行实时定量pcr（qrt-pcr）和westernblotting，取24孔板内细胞进行双荧光素酶报告基因检测。结果当hbmscs中hsa-mir-654-5p过表达时，bmp2的mrna和蛋白表达水平均发生明显下调；双荧光素酶报告基因检测提示，bmp2的预测靶位点直接受hsa-mir-654-5p的抑制调控，该靶位点被突变后hsa-mir-654-5p对bmp2的抑制作用消失。结论hsa-mir-654-5p可通过作用于bmp2的特定靶位点而直接抑制bmp2的mrna和蛋白表达。hsa-mir-654-5p的变化在成骨分化调控过程中具有重要作用。