p38丝裂原激活蛋白激酶基因重组慢病毒载体的构建及其在建立人前列腺癌稳定细胞株中的应用

摘要：目的构建p38丝裂原激活蛋白激酶基因（mapk）重组慢病毒载体并建立表达外源性p38基因的人前列腺癌稳定细胞株。方法采用限制性内切酶酶切、t4dna连接酶连接等方法，将egfp/p38融合基因插入慢病毒载体ptyfef1α-ires-egfp中，构建启动子ef1α调控的egfp/p38共表达慢病毒载体ptyf-ef1α-egfp/p38，经酶切鉴定后，利用慢病毒三质粒系统，通过脂质体法转染包装细胞hek293t细胞，收集病毒上清后转导人前列腺癌du145细胞株，经有限稀释法筛选重组egfp/p38稳定细胞株，用westernblotting检测细胞总p38的表达，用计数法绘制细胞的生长曲线。结果经酶切鉴定，成功构建egfp/p38重组慢病毒载体，并包装慢病毒，检测病毒悬液的滴度为4.7×106tu/ml，利用此病毒悬液感染du145细胞，成功筛选到egfp/p38稳定表达细胞株，westernblotting显示该细胞株能稳定表达外源性egfp/p38融合蛋白，这种过表达p38的细胞株的生长速度明显低于对照组。结论成功构建p38mapk重组慢病毒载体并建立了表达外源性p38mapk基因的稳定细胞株egfp/p38-du145，细胞内p38过表达能够抑制du145细胞的增殖。