稳定表达macc1的胃癌bgc-823/pbabb-puro-macc1细胞株的建立及其肿瘤相关基因的研究基因

摘要：目的构建含有全长肠癌转移相关基因(macc1)的表达载体，建立稳定表达macc1的胃癌bgc-823/pbabb-puro-macc1细胞系，通过基因芯片技术筛选出转染macc1后胃癌细胞株的差异表达基因，探讨macc1基因与差异基因之间可能的调节机制或信号通路。方法以人胚肾293ft细胞为模板，经pcr扩增获全长macc1cdna序列，将目的基因序列克隆入带有绿色荧光蛋白报告基因的pbabb-puro表达载体，建立pbabb-puro-macc1表达载体。经限制性内切酶酶切鉴定、测序并转染293ft细胞观察报告基因表达情况判断是否构建成功。构建成功后的pbabb-puro-macc1表达载体转染人胃癌bgc-823细胞，建立稳定表达macc1的bgc-823/pbabb-puro-macc1细胞。qrt-pcr及westernblot检测转染细胞的macc1基因表达，应用基因芯片技术筛选出转染macc1基因后胃癌细胞株的差异表达基因并对其探讨研究。结果成功扩增全长macc1cdna，经测序鉴定序列完全正确；转染293ft细胞可见清晰的绿色荧光表达。bgc-823/pbabb-puro-macc1细胞能够稳定表达macc1。基因芯片筛选出差异基因发现上调基因33个，下调基因24个，这些差异表达基因的功能涉及多个方面。结论成功构建了含有全长macc1cdna的表达载体系统，建立了稳定表达macc1的bgc-823/pbabb-puro-macc1细胞，通过对差异基因的分析发现macc1可能引起胃癌细胞株bgc-823基因表达谱中一些非常重要的分子的改变，为macc1基因进一步研究奠定了良好基础。