rheb和rheb’d60k突变基因重组慢病毒载体的构建、鉴定及其对肝癌细胞凋亡的影响

摘要：目的构建携带rheb和rheb’d60k突变基因的重组慢病毒载体,并鉴定其在mcf-7细胞中的表达效果，观察其对肝癌细胞凋亡的影响。方法pcr法扩增rheb和rheb’d60k突变基因，构建重组质粒lv31-rheb-wt、lv31-rheb-d60k，脂质体法将重组慢病毒载体和包装质粒混合物共转染hek-293ft细胞，包装产生慢病毒颗粒。将病毒感染mcf-7细胞后westernblotting检测rheb及ps6蛋白的表达；将病毒感染sk-hep-1细胞饥饿处理后观察其凋亡情况。结果pcr及测序表明成功构建了lv31-rheb-wt、lv31-rheb-d60k重组慢病毒载体。westernblotting结果显示慢病毒lv31-rheb-wt感染的mcf-7细胞内rheb下游的ps6蛋白表达多于慢病毒lv31-rheb-d60k感染的mcf-7细胞。显微镜下慢病毒lv31-rheb-d60k感染的sk-hep-1细胞饥饿后凋亡数目多于慢病毒lv31-rheb-wt感染的sk-hep-1细胞。结论本研究成功构建了rheb和rheb’d60k突变基因重组慢病毒载体,初步观察到该突变基因重组慢病毒载体可诱导肝癌细胞凋亡，为进一步研究rheb基因在肝癌发生发展中的作用，进而开展肝癌的临床靶向治疗研究奠定了基础。