利用小干扰rna表达框鉴定小鼠骨髓树突状细胞有效沉默relb基因的实验研究

目的构建靶向小鼠relb基因的小干扰rna(sirna)表达框,鉴定针对小鼠骨髓树突状细胞(dc)的relb基因最有效的sirna序列。方法利用pcr方法构建3个不同位点的表达框,r1/sirna、r2/sirna和r3/sirna分别位于1027、302和1121位点。利用阳离子脂质体advantgene转染小鼠骨髓dc,转染24h后,脂多糖(lps)刺激dc,用rt-pcr和免疫荧光方法检测dcrelb基因表达的变化。结果经lps刺激后dc成熟,relb基因表达显著高于未成熟dc;r1/sirna和r3/sirna转染dc后,lps刺激仍然可以增强relb基因表达,而r2/sirna转染dc后,lps刺激不能增加relb基因表达。结论r2/sirna可有效抑制relb基因表达,有望用于构建新的耐受性dc应用于临床免疫耐受的诱导。更多还原