人膀胱癌异质性表型相关基因的筛选与鉴定

目的筛选和鉴定膀胱肿瘤异质性生物学表型相关的基因。方法以已建立的两株同一来源、不同生物学表型的膀胱移行细胞癌细胞系为材料,采用抑制性削减杂交技术筛选差异表达的基因片段,构建cdna文库;挑取克隆进行筛选,获得差异表达片段,测序并与genbank比对,northernblotting验证差异片段在两株细胞系的不同表达。结果建立了两个消减文库,分别含有168和206个白色克隆,白色克隆含有约200￣700bp的插入片段,对这些克隆进行筛选,获得35个差异表达基因片段,其中15个对应于细胞骨架蛋白、细胞代谢酶基因等已知基因,另外19个为未知功能基因,1个为新est片段,注册genbank(注册号为dr008207)。结论抑制性消减杂交技术是筛选、克隆差异表达基因的有效手段;keratin7、vimentin等细胞骨架蛋白的不同表达,与细胞形态的表型差异有关;ddh等代谢基因的不同,与细胞的药物敏感性差异相关;筛选到的新基因片段为进一步克隆其全长、研究基因功能提供了实验基础。更多还原