雷帕霉素对高糖诱导的肾系膜细胞自噬抑制、氧化损伤和衰老的影响

摘要：目的探讨雷帕霉素及3-甲基腺嘌呤（3-ma）对高糖诱导的原代大鼠系膜细胞自噬、氧化损伤及衰老的影响。方法从大鼠肾分离培养原代肾小球系膜细胞（gmcs），分为正常对照组、高糖组、高糖+雷帕霉素（自噬增强剂）及高糖+3-甲基腺嘌呤（自噬抑制剂）干预组。在细胞培养24h、72h及10d时，westernblotting观测自噬标志物-自噬相关基因lc3及泛素结合蛋白p62/sqstmi的表达变化；硫代巴比妥酸法检测细胞脂质损伤产物-丙二醛（mda）水平，2,4-二硝基苯肼（dnph）比色法测定细胞蛋白质损伤产物-羰基含量，通过进行衰老相关β-半乳糖苷酶活性（sa-β-gal）染色及衰老相关异染色质斑块（sahf）分析检测细胞的衰老程度。结果与对照组相比，细胞经高糖处理72h和10d后，自噬标志物lc3表达降低，p62/sqstmi升高，mda及羰基含量上升（均p<0.05）；处理72h细胞sa-β-gal染色阳性率增加（p<0.05），细胞核异染色质斑块形成增加。高糖培养的细胞用雷帕霉素干预72h和10d后，lc3表达升高，p62/sqstmi表达下降，mda及蛋白质羰基含量均下降（均p<0.05），72h后细胞sa-β-gal染色阳性率下降（p<0.05），细胞核异染色质斑块形成减少；高糖培养的细胞用3-ma干预72h和10d后，lc3表达下降，p62/sqstmi表达升高，mda及蛋白质羰基含量升高（均p<0.05），72h细胞sa-β-gal染色阳性率上升（p<0.05），细胞核斑块形成增多。结论高糖可抑制系膜细胞自噬功能，促进系膜细胞氧化损伤，加速细胞衰老；雷帕霉素干预可减轻高糖对系膜细胞自噬功能抑制，减少氧化损伤，延缓衰老；3-ma加重高糖对系膜细胞自噬功能的抑制，进一步加重细胞氧化损伤，加速衰老。