日本血吸虫小热休克蛋白sjp40的rna干扰效应

摘要：目的研究日本血吸虫小热休克蛋白(shsp)sjp40基因的rna干扰效应及其干扰后日本血吸虫hsp60、hsp70、hsp90基因在mrna水平出现的协同效应，观察各期虫体sjp40、sjhsp60、sjhsp70、sjhsp90基因mrna表达水平。方法以双链rna(dsrna)实现rna干扰。体外转录合成dsrna，将sjp40的dsrna（dssjp40）及阴性对照gfp的dsrna（dsgfp）通过浸泡法转染到日本血吸虫成虫中，体外培养7d后用trizol法提取其总rna及总蛋白，实时荧光定量pcr(qpcr)检测sjp40基因及sjhsp60、sjhsp70、sjhsp90基因mrna的表达，westernblot检测sjp40蛋白表达产物。提取各期虫体总rna，qpcr检测sjp40、sjhsp60、sjhsp70、sjhsp90基因的mrna表达。结果转染后sjp40dsrna转染组目的基因的转录水平较阴性对照gfpdsrna转染组下降了80%左右；蛋白质水平较空白对照及阴性对照组(dsgfp)出现明显降低，qpcr结果显示在sjp40基因rna干扰后sjhsp60、sjhsp70、sjhsp90基因的mrna表达水平未发现明显变化。此四种hsps在日本血吸虫生活史不同时期mrna表达存在明显差异，sjp40基因在虫卵期mran水平表达相对其他hsps基因高。结论dssjp40rnai可特异性抑制sjp40的表达，但对sjhsp60、sjhsp70、sjhsp90基因mrna的表达没有明显的影响。