小鼠前列腺干细胞抗原的原核表达、纯化及抗原活性检测

摘要：目的rt-pcr扩增小鼠前列腺干细胞抗原（mpsca）基因，构建原核表达质粒pet-42a-mpsca，诱导mpsca蛋白表达并纯化，并检测mpsca蛋白的抗原活性。方法利用rt-pcr的方法从小鼠前列腺癌细胞系rm-1细胞中扩增mpsca基因，测序正确后pcr的方法去掉mpsca的信号肽序列将其克隆至原核表达载体pet-42a中构建重组载体pet-42a-mpsca。将其转化至大肠杆菌bl21（de3）中诱导表达，随后将表达的融合蛋白进行纯化。经sds-page分析后，westernblot检测纯化的蛋白，将纯化蛋白进一步包板后用elisa法对其抗原活性进行评价。结果测序结果证实成功扩增出全长mpsca基因；酶切和测序结果证实pet-42a-mpsca原核表达载体构建成功；转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白；westernblot检测证实纯化的蛋白能与特异性的抗体发生反应；elisa检测显示纯化后的mpsca抗原具有免疫原性。结论成功扩增出小鼠全长psca基因，成功构建了mpsca基因的原核表达载体，获得了纯化的mpsca蛋白，该蛋白具有良好的抗原活性，为进一步研究以psca为靶点的前列腺癌的免疫治疗奠定了基础。