海马胆碱能神经刺激肽通过活化3型毒蕈碱受体促进ins-1细胞胰岛素释放

摘要：目的明确海马胆碱能神经刺激肽(hcnp)对ins-1细胞胰岛素分泌影响，并对其可能作用的毒蕈碱样胆碱能受体途径进行分析。方法ins-1细胞随机分为3组：对照组、hcnp组、hcnp+佛波酯（pma）组。对照组给予rpmi1640液培养，hcnp组给予人工合成hcnp（50pg/ml）与rpmi1640液共培养，hcnp+pma组予人工合成hcnp与rpmi1640液共培养后，行胰岛素释放前18h加入pma（10nmol/l）；应用放射免疫方法检测各组不同浓度葡萄糖培养液中胰岛素含量。实时定量pcr检测对照组、hcnp组hcnp前体蛋白（hcnp-pp）、胆碱乙酰转移酶（cholineacetyltransferase,chat）、3型毒蕈碱样受体（3-typemuscarinicreceptor,m3r）基因水平表达情况。结果浓度为3.3mmol/l葡萄糖，三组间胰岛素含量无明显差异。浓度为5.6mmol/l、16.7mmol/l葡萄糖作用下，hcnp组胰岛素含量均高于对照、hcnp+pma组，差异具有统计学意义。hcnp组ins-1细胞hcnp-pp、chat、m3r三者mrna含量均高于对照组，差异具有统计学意义。结论hcnp通过提高chat活性，推测影响乙酰胆碱合成，进一步活化m3r，促进胰岛素分泌，pma可阻断此作用。