原核表达系统pet28a(+)中抗cd20微抗体的构建和表达
, PP. 74-80
Keywords: cd20,minibody,原核表达,大肠杆菌
Abstract:
目的:改造rituximab，构建包含vl、vh和ch3的抗cd20微抗体minibody，并探索诱导其可溶性表达的最佳方法．方法:首先通过overlappcr将rituximab的vl和vh通过linker连接在一起，成为单链抗体scfv，再将scfv和人源igg1ch3通过人源igg1铰链区连成minibody的cdna．将其克隆至表达载体pet28a(+)中，并在大肠杆菌中用iptg诱导表达．结果:sds-page和westernblot结果表明，抗cd20的微抗体基因表达产物分子量约41.88kda，在20℃、1.0mmol/liptg诱导24h时minibody的可溶性表达量最大，同时还有包涵体形式的蛋白．可溶性抗体蛋白通过镍柱纯化，纯度达到90.25%，包涵体经过变、复性获得了高纯度的抗体蛋白．重组蛋白minibody可特异性地被兔抗人igg1单克隆抗体识别，并且可特异性结合靶抗原cd20．结论:抗cd20微抗体minibody基因在此原核表达系统中成功表达，为其生物学功能和更好地针对b淋巴系统恶性肿瘤的靶向治疗奠定了基础．
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