重组人trail胞外片段的原核表达系统选择及蛋白复性研究

采用pcr技术从人肝脏cdna文库扩增出编码114~281位氨基酸的trail基因片段,将之克隆至原核表达载体pet-30a、pqe-30和pjla503中,上述重组载体经iptg诱导表达后,sds-page鉴定显示pet-30a系统表达效率最高,目的蛋白占菌体总蛋白含量的40%左右;采用透析法或梯度稀释法对trail胞外区片段包涵体进行复性,非还原sds-page的结果显示梯度稀释法明显好于透析法;纯化后的trail胞外区片段蛋白具有明显的生物学活性,效果与标准品相似;通过添加不同的折叠促进剂对复性效率影响的研究,确立了trail胞外区片段适宜的复性方法,复性效率达75%~80%.