刺槐幼苗中l-亮氨酸氨基转移酶的提纯和特性

<正>刺槐幼苗中的l-亮氨酸氨基转移酶(ec2.6.1.6,lat)经热处理、硫酸铵沉淀、sephadexg-100和deae-纤维素柱层析被提纯61倍,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一的带。这种酶的分子量为7×10~4,最适ph为9.0,最适温度为60℃,它对l-亮氨酸的km为2.5mm,对α-酮戊二酸的km为3.5mm;全酶的吸收光谱在230和280nm显示两个主峰,在320和425nm显示两个小峰,透析后320和425nm的小峰基本消失;这种脱辅基酶蛋白无活力,但与100μm磷酸吡哆醛保温1～4h便可恢复活力80～100％,这表示刺槐lat的辅基是磷酸吡哆醛;一些羰基试剂和底物类似物(二羧酸)能抑制这种酶的活力,除co~(2+)外,mg~(2+)、mn~(2+)、cu~(2+)、hg~(2+)、fe~(3+)和al~(3+)对酶活力都无抑制,1×10~(-4)mhg~(2+)和1×10~(-3)m金属螯合剂乙二胺四乙酸(edta)对酶无抑制作用暗示,刺槐lat没有对活力所需要的硫氢基和金属离子。