板栗主要栽培品种的分子鉴别及遗传分析

<正>应用ｒａｐｄ分子标记手段，研究板栗品种的遗传多样性，建立了板栗品种ｒａｐｄ标记的标准程序，以及板栗品种的ｄｎａ指纹数据库，为板栗育种提供理论依据，并为板栗品种鉴别提供了准确、可靠的标准方法，主要结果与结论如下：１？板栗营养体中酚类化合物和单宁物质含量高，ｄｎａ提取和纯化非常困难。本研究对ｃｔａｂ法加以改良，总结出能够产生扩增产物的模板ｄｎａ提取和纯化方法。２？建立了稳定的板栗ｄｎａ扩增反应体系。并对影响ｒａｐｄ反应效果和特异性的两个关键因子，即对退火温度和镁离子浓度进行研究。板栗ｄｎａ扩增反应体系中，反应体积为２０μｌ。９４℃预变性２ｍｉｎ，然后执行３８个扩增循环，每个循环中，９４℃变性３０ｓ，７２℃延伸９０ｓ，最后７２℃延伸７ｍｉｎ。从ｓ系列的ｓ１～ｓ１００共１００个引物中筛选出适合板栗基因组ｄｎａ，能够扩增出稳定产物、扩增谱带清晰、特异性强的１６个引物供板栗品种ｒａｐｄ分析用。１６个引物扩增的位点总数为１１９个，特异性多态位点６９个，多态位点占总数的５８％。３？研究品种间的遗传多样性。４６个板栗品种样品的ｄｎａ，用１６个引物进行扩增反应，产生６９个多态位点。研究结果表明，各个位点上遗传多样性程度存在较大差别，有效等位基因数目（ｎｅ）最大值为１？９９９０，最小值为１？０４４４；基因多样度（ｈ）的最大值为０？４９９８，最小值为０？０４２５；ｓｈａｎｎｏｎ信息指数的最大值为０？６９２９，最小值为０？１０４７。所检测位点的平均有效等位基因数目为１？５２６０，平均基因多样度为０？３６１８，平均信息指数为０．８４３２。有效等位基因数目、平均基因多样度和平均ｓｈａｎｎｏｎ信息指数的标准误都较小，分别为０．３０９６、０？１４１８、０？１７４８，估计精度较高。这三个遗传多样性度量表明板栗品种间具有较高的遗传多样性。品种间遗传距离最大值为０？８００１，相应的遗传共享度为０？４４９３；品种间遗传距离最小值为０？０９１０，对应的遗传共享度为０？９１３０。遗传距离是评价品种间近缘关系的良好指标。４？本研究建立了４６个板栗品种的ｄｎａ指纹数据库，并分析出这些板栗品种分子鉴别的最优化引物组合。结果表明，采用１６个能产生特异扩增产生的引物中的４个引物，即可准确鉴别所研究的４６个板栗品种。分子分类能够有效地揭示形态相似、经济性状相近或部分地理种源相同的品种间的近缘关系。分子标记方法鉴别品种具有广阔的前景。