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OALib Journal期刊
ISSN: 2333-9721
费用：99美元
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东方百合issr-pcr反应体系的正交优化
DOI: 10.3969/j.jssn.1000-2006.2012.05.007, PP. 42-46
Keywords: 东方百合,issr-pcr,正交设计
Abstract:
以东方百合‘constanta’和‘sorbonne’以及9份‘constanta’בsorbonne’的f？？1代为试材，采用改良的ctab法提取百合嫩叶dna，利用正交设计l？？16（4？？5）对东方百合issr-pcr反应体系的？taq？酶、mg？？2+、模板dna、dntps和引物5种因素在4个水平上进行优化试验，采用直观分析结合方差分析评价扩增结果。最终获得的最佳反应体系为：在20μl反应体系中，含？taq？dna聚合酶0.5μmol/min、mg？？2+1.75mmol/ml、模板dna40～100ng、dntps0.15mmol/ml、引物0.6μmol/l、10×pcrbuffer2μl，不足部分以ddh？？2o补足。在获得最佳反应体系的基础上采用单因素实验确定了引物最佳退火温度范围为55～45℃，最佳循环次数为30次以及延伸时间为1.5min。应用该优化的反应体系，对‘constanta’和‘sorbonne’以及9份‘constanta’בsorbonne’的f？？1代dna进行issr-pcr扩增，结果显示优化的反应体系具有较高的扩增稳定性。
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