杜仲aflp反应体系的建立及优化

【目的】建立并优化适合杜仲的aflp技术体系，为进一步构建其遗传图谱及开展分子标记辅助育种奠定基础。【方法】对杜仲基因组dna提取方法、酶切与连接体系、预扩增和选择性扩增程序的影响因素进行分析，并对适合杜仲aflp分析的引物组合进行筛选。【结果】模板dna的提取采用改进的ctab法，酶切模板dna用量500ng,酶切时间6h，连接反应时间6h，预扩增产物最适稀释倍数30倍。同时筛选出e-aag+m-caa，e-aag+m-cat，e-aag+m-cta，e-aag+m-ctg，e-aca+m-caa，e-aca+m-cta，e-acc+m-ctg共7对适合杜仲aflp分析的引物组合。【结论】经重复验证，建立的aflp反应体系适用于杜仲的aflp分析。