山羊输卵管上皮细胞的分离与培养

【目的】分离并培养山羊输卵管上皮细胞，研究其生长特性。【方法】采用胰酶、胶原酶及机械刮取方法分离输卵管上皮细胞并分析培养效果；选择免疫细胞化学染色对细胞进行鉴定；向培养液中添加下丘脑粗提物、胰岛素、egf和血清，探讨其对输卵管上皮细胞体外培养的影响。【结果】胰酶对山羊输卵管上皮细胞的分离效果较差，胶原酶次之，机械刮取方法较好。机械刮取法分离的细胞以细胞团居多，接种后8～12h开始贴壁生长，生长2～3d细胞呈现明显的铺路石形态。免疫细胞化学染色显示，细胞角蛋白阳性率在95%以上。上皮细胞培养体系中含少量血清及人egf、胰岛素，能有效促进原代和传代输卵管上皮细胞的生长，以体积分数5%血清+egf的培养效果较好。【结论】采用机械刮取法分离培养的输卵管上皮细胞，在体外可连续传到第8代，传代细胞活性强、纯度高，可为输卵管上皮细胞相关功能的研究提供材料。