成年昆明小鼠雄性生殖干细胞的分离培养及其多能性研究

【目的】从成年昆明小鼠睾丸组织中分离具有多能性的雄性生殖干细胞(malegermlinestemcells,mgscs)。【方法】采用机械法和2步酶消化法分离出成年昆明小鼠的精原细胞，经差速贴壁后，培养在小鼠胎儿成纤维细胞(mef)饲养层上，2周后得到类胚胎干细胞（escs）样mgscs。对得到的mgscs进行碱性磷酸酶（ap）染色、免疫荧光染色、rt-pcr、体内分化等检测。【结果】mgscs具有类似escs的形态和多能性，ap染色呈阳性，免疫荧光oct4、vasa染色呈阳性，rt-pcr检测其表达oct4、nanog、sox2等多能性基因和vasa、c-kit等生殖细胞的标记基因，在免疫缺陷鼠体内能形成畸胎瘤,组织学检测其可形成包括3个胚层在内的多种类型细胞。【结论】从成年昆明小鼠睾丸分离的精原细胞，在体外培养去分化形成了具有类escs生物学特性的mgscs，mgscs既具有多能性，也具有生殖细胞的基本生物学特性。