草鱼bac文库中tlr3基因的筛选及表达特征的研究

【目的】从草鱼的bac文库中筛选tlr3基因的阳性克隆，研究该基因在草鱼体内的表达规律，为进一步研究奠定基础。【方法】用同位素p32标记的探针，对53216个bac克隆以双份平行形式制备的dna尼龙膜进行杂交筛选，用半定量方法检测tlr3在草鱼不同组织（鳃、心脏、肠、肝胰脏、肌肉、皮肤、脾脏、头肾和中肾）中的表达模式，用实时荧光定量rtpcr研究草鱼感染呼肠孤病毒后不同时间tlr3的表达规律。【结果】获得了2个tlr3基因的阳性bac克隆，该基因在被检测的9个组织中都有表达，其中在脾脏、皮肤中的表达量较高。在感染呼肠孤病毒后24h，草鱼肝胰脏中tlr3的相对表达量显著升高（p<0.05）；感染后48h，其相对表达量恢复到正常水平（p>0.05）。【结论】成功筛选到草鱼tlr3的bac克隆，该基因在草鱼体内不同组织中有广泛表达，并且参与了草鱼抗呼肠孤病毒的过程。