新生犊牛睾丸支持细胞的高效分离培养与鉴定

【目的】采用改良方法对犊牛睾丸支持细胞进行体外快速分离培养，以期建立一种简单快捷的支持细胞原代培养方法。【方法】采用1.0g/l的ⅳ型胶原酶和2.5g/l的胰蛋白酶，对经分离曲细精管和组织剪碎2种方法处理的睾丸组织进行次第消化，比较2种方法对睾丸支持细胞分离效果的影响；采用福尔根染色法和免疫细胞化学方法鉴定睾丸支持细胞。【结果】睾丸组织采用分离曲细精管后进行酶消化的时间（8min）较组织剪碎法（15min）短，并且前者消化所得有效细胞数（1.0×107）高于后者（0.81×107），两者具有显著差异（p<0.05）；福尔根染色和免疫细胞化学染色结果显示，分离细胞有卫星核小体存在，且细胞中abp阳性表达，表明分离培养的细胞确为睾丸支持细胞。【结论】睾丸组织经曲细精管分离后进行胶原酶和胰蛋白酶次第消化，有助于快速高效分离睾丸支持细胞。