苹果果实l-半乳糖脱氢酶cdna的克隆及其rnai载体的构建

【目的】从“皇家嘎拉”苹果幼果外果皮中克隆l-半乳糖脱氢酶(l-galactosedehydrogenase,galdh)cdna，进行生物信息学分析并构建其rnai植物表达载体，为该基因功能鉴定奠定基础。【方法】应用同源序列克隆法克隆“皇家嘎拉”苹果galdh基因，并进行生物信息学分析；利用噬菌体同源重组原理构建其rnai植物表达载体pmdr-galdh，并导入农杆菌eha105。【结果】通过rt-pcr扩增得到1条约1.1kb的条带，序列分析表明，该片段长为1111bp，包含一个975bp的开放阅读框，可编码324个氨基酸残基，包含有醛酮还原酶的保守结构域和3个跨膜螺旋结构，其理论上的等电点pi为5.44，蛋白分子质量为34.99ku；聚类分析显示,苹果galdh核苷酸与已知其他植物galdh核苷酸的相似性均在95%以上，判断其为苹果galdh基因cdna全长，命名为mdgaldh(genbank登录号为：gq131419)。另外，通过rt-pcr获得galdh基因保守区段，成功构建了其rnai植物表达载体pmdr-galdh。【结论】从“皇家嘎拉”苹果中克隆了galdhcdna的编码区全长，并构建了该基因的rnai植物表达载体。