大白菜cms雄性不育发生相关基因的克隆与分析

【目的】筛选和克隆与大白菜cms雄性不育相关的应答基因。【方法】以大白菜不育系06j45和恢复系01s325-1为材料，利用cdna-aflp方法从f2s5群体不育株和可育株花蕾中筛选分离差异表达基因，通过race技术对该差异表达基因进行克隆，对基因序列进行生物信息学分析，并利用qrt-pcr定量分析不育株和可育株花蕾发育过程中基因表达的变化。【结果】在f2s5可育株花蕾cdna混合池中扩增出1条特异表达条带，通过3′race和5′race克隆得到相应的brup基因，全长1407bp，编码403个氨基酸残基。生物信息学分析表明，brup基因与大白菜brup007268基因序列相近，由6个外显子和5个内含子组成，与拟南芥未知功能基因at3g56750同源，一致性达90%。保守结构域分析表明，brup基因可能是1个具有跨膜结构的o型岩澡糖基转移酶基因，主要功能是进行糖基化修饰。qrt-pcr定量发现，brup只在花蕾发育早中期表达，且在大白菜不育株花蕾发育早期其表达量显著性下调。【结论】成功筛选克隆获得1个与大白菜雄性不育发生相关的功能未知基因brup。