条锈菌诱导的小麦β-1,3-葡聚糖酶基因编码区的克隆及原核表达

为研究小麦与条锈菌互作过程中β-1,3-葡聚糖酶基因的功能,根据小麦β-1,3-葡聚糖酶cdna全长序列设计合成引物,通过rt-pcr方法获得小麦β-1,3-葡聚糖酶基因编码区,将其克隆至pgemt-easyvector,经hindⅲ和bamhⅰ双酶切回收目的片断,并将其定向克隆到pet-32a（＋）vector中构建表达载体glu-pet-32a（＋）,转化e.colibl21（de3）,用iptg进行诱导表达。结果表明,小麦β-1,3-葡聚糖酶基因在大肠杆菌中得到了高效表达,获得了分子量约为49ku的融合蛋白,表达量约占菌体总蛋白的19%。最佳诱导条件为：0.3mmol/liptg,37℃诱导4h。