猪瘟病毒rt-nestedpcr检测方法的优化和应用

为了优化猪瘟病毒的rt-nestedpcr检测方法,对福建省猪瘟流行情况进行了调查。根据genbank上发表的猪瘟病毒shimen株基因序列设计并合成了2对引物,优化了猪瘟病毒(classicalswinefevervirus,csfv)的rt-nestedpcr检测方法,并对所优化的rt-nestedpcr特异性进行了检验。结果表明,该方法检测csfvcdna含量的最低极限为1×10-7ng/ml,只有csfv扩增出了272bp的目的条带,从猪繁殖与呼吸综合征病毒(prrsv)、猪流感病毒(siv)、猪圆环病毒2型(pcv2)、猪伪狂犬病病毒(prv)和猪细小病毒(ppv)阳性毒和健康猪脾、肝组织及阴性pk-15细胞均未扩增出特异性条带,说明该方法特异性强。应用此方法对福建省133份病料进行检测,结果有60份病料为阳性,阳性率为45.1%。结果提示优化的检测方法灵敏度高,特异性强;福建省猪群csfv感染率高,需要加强csf预防控制工作。