字佐美曲霉e001菌株xynⅱ基因的克隆和融合表达

以宇佐美曲霉（aspergillususamii）e001株基因组dna为模板，pcr扩增了编码木聚糖酶ⅱ（xylanases，xynⅱ）成熟肽的dna片段。构建重组克隆质粒pucm-t-xynⅱ，并以其为摸板，pcr扩增xynⅱ成熟肽的cdna片段（555bp），连接于表达质粒pgex-5x-3的bamhⅰ和ecorⅰ酶切位点间，构建重组表达质粒pgex-5x-3-xynⅱ，转化e.coli;bl21（de3），iptg诱导表达，并对表达产物进行检测。结果表明，xynⅱdna中存在1个内含子，长度为51bp；融合蛋白gst-xynⅱ主要以包涵体形式存在，相对分子质量约为50ku，iptg诱导1，3和5h融合蛋白gst-xynⅱ的表达量分别约占菌体总蛋白量的12.6％，25.3％和32.1％。表明宇佐美曲霉e001菌株xynⅱ基因融合表达成功。