鸡β-防御素3(gal-3)基因的克隆、表达及抑菌活性研究

【目的】克隆和表达鸡β-防御素3(gal-3)基因，并对其抑菌活性进行研究，为寻找替代抗生素的抗菌肽提供试验依据。【方法】利用rt-pcr方法，从鸡心脏中分离并克隆了鸡gal-3基因，将其与分子伴侣基因sumo相融合，再将该融合基因与原核表达载体pet-20b连接后转化至bl21（de3）宿主细胞中，经iptg诱导后，对表达产物进行sds-page和westernblot分析；最后，对gal-3融合蛋白进行纯化，并对表达产物进行体外抑菌试验。【结果】通过rt-pcr扩增获得了约240bp的鸡gal-3基因，经iptg诱导获得约26ku的蛋白。iptg在终浓度为0.6mmol/l，33℃诱导4h，诱导时菌体a600为0.6，蛋白表达量最高，且多数以可溶形式存在，33℃上清中的蛋白含量比37℃上清高。纯化的蛋白对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌均有明显的抑菌活性。【结论】成功克隆并表达了鸡gal-3基因，其原核表达产物对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌具有一定的抑菌活性