拟南芥dof1基因原核表达载体的构建及应用

【目的】构建拟南芥转录因子dof1基因的原核表达载体，进行原核表达并制备其蛋白抗体。【方法】利用rt-pcr方法从拟南芥中克隆转录因子dof1基因，将其连接到原核表达载体pet-32a(+)上，构建重组原核表达载体pet32a(+)-dof1，经酶切鉴定和测序验证后将其转化至大肠杆菌bl21中，经iptg诱导后，纯化重组蛋白，以分离到的重组蛋白为抗原免疫小鼠制备抗血清，检测植物中dof1蛋白表达水平。【结果】成功构建了拟南芥转录因子dof1基因的原核表达载体pet32a(+)-dof1，在28℃、1mmol/liptg诱导6h的大肠杆菌中可高效表达分子质量约为42ku的重组蛋白，其分泌到细胞质中，不形成包涵体；western-blotting检测结果证明，制备的抗血清有较好的抗原-抗体识别反应。【结论】成功实现了dof1基因的原核表达，制备出的重组蛋白dof1多克隆抗体可用于植物dof蛋白表达水平的检测，可为dof1基因的进一步研究奠定基础。