luman-端融合蛋白单克隆抗体的制备

【目的】制备小鼠抗luman-n端融合蛋白单克隆抗体。【方法】将gst-luman-n端载体转化大肠杆菌bl21，用iptg进行诱导表达，并进行sds-page电泳，用电洗脱的方法纯化融合蛋白；以纯化的融合蛋白为抗原免疫balb/c小鼠，取免疫小鼠的脾细胞与sp2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合，利用间接elisa方法筛选阳性孔，采用有限稀释法进行亚克隆，筛选具有抗体分泌活性的单克隆细胞株；应用westernblot、间接elisa等方法进行克隆株稳定性、抗体特性的鉴定。【结果】获得1株能稳定分泌抗luman-n端融合蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2c8)，其腹水elisa单抗效价为1∶1×107。亚型鉴定和亲和力常数分析表明，2c8产生的单克隆抗体亚型为igg2b型，其亲和力常数约为1×107。westernblot分析证明，该株单抗能与原核表达的luman-n端融合蛋白特异性结合，与gst-lrf-n端融合蛋白没有特异性结合。染色体分析结果表明，2c8细胞株染色体数目为(53±2)对。【结论】获得了抗luman-n端融合蛋白的抗体，该抗体具有良好的特异性和结合活性，可用于对luman-n端蛋白的进一步研究。