bcl-2/egfp融合基因真核表达质粒的构建

为深入研究bcl-2对细胞凋亡的调控机制和肿瘤发生发展的影响，应用基因重组手段，根据表达载体pegfp-cl上的多克隆位点和bcl-2基因序列设计了1对引物，对含有bcl-2基因的质粒pwb-bcl进行了pcr扩增，得到了708bp的目的片断。将其克隆到pmd18-tvector，筛选阳性克隆并测序，序列分析表明，其与原初序列同源性达99%。将bcl-2插入到载体启动子下游，与报告基因绿色荧光蛋白(enhancergreenfluorescentprotein，egfp)融合，经限制性内切酶酶切和pcr鉴定，证明bcl-2/egfp真核表达质粒构建成功。