山羊胎儿成纤维细胞的冷冻保存和体外培养

将胎儿成纤维细胞悬浮于不同的冷冻保护液中，在不同的温度下进行冷冻保存试验。结果显示，当保护液中含有900ml/l胎牛血清(fbs)时，-196℃下保存的山羊胎儿成纤维细胞解冻后的细胞贴壁率高于-80℃，且前者贴壁细胞增殖也较后者快，二者间差异显著；而在-20℃条件下只有一小部分细胞能够存活，与前两者相比差异极显著，说明-20℃不适合冷冻胎儿细胞。冷冻保护液中含有100ml/l二甲基亚砜(dmso)的保护效果明显好于50ml/ldmso，二者间差异显著。用组织块法培养的细胞，在两种培养基dmem和m199中添加100ml/lfbs和2mmol/l2-巯基乙醇(2-me)，其组织块成活率及细胞生长速度均高于单纯添加100ml/lfbs，同时证明dmem和m199都能用于胎儿成纤维细胞的体外培养。以dmem培养液为基础，分别添加2mmol/l2-me，5ml/lfbs，100ml/lfbs和2mmol/l2-me+100ml/lfbs对山羊胎儿成纤维细胞进行体外培养，结果显示，细胞在100ml/lfbs和2mmol/l2-me+100ml/lfbs培养液中生长迅速，两者间无明显差异，2-me的存在促进了细胞的增殖；两者都与添加2mmol/l2-me组存在显著差异；添加2mmol/l2-me和5ml/lfbs相比，前者也明显地起到了促进细胞增殖的作用，二者间差异显著。说明2-me对细胞的促生长作用大于抗氧化作用，100ml/lfbs能保证细胞的生长和增殖，5ml/lfbs在培养液中长期存在不仅抑制细胞分裂，而且导致大量丢失。