梨叶片总蛋白提取及双向电泳体系的建立

【目的】探索建立有效的梨叶片蛋白质组双向电泳体系，为梨蛋白质组的后续研究提供参考。【方法】以早酥梨叶片为材料，比较蛋白质提取方法、蛋白质裂解时间、ipg胶条的ph梯度和长度、等电聚焦程序及sdspage电泳参数对梨叶片蛋白双向电泳结果的影响。【结果】采用第2种改良的三氯乙酸（tca）/丙酮沉淀法提取梨叶片总蛋白，蛋白质裂解1h，选用长17cm、ph4～7的ipg胶条及聚焦程序ⅱ进行等电聚焦，于100v30min、180v6h条件下进行sds-page垂直电泳，可以获得背景清晰、重复性好的双向电泳图谱。【结论】建立并优化了适用于梨叶片蛋白质组分析的双向电泳体系。