扶桑绵粉蚧钙调蛋白基因的原核表达与表达谱分析

【目的】探究我国重要入侵生物扶桑绵粉蚧(phenacoccussolenopsistinsley)钙调蛋白基因（pscam）在各虫态中的表达差异及pscam蛋白在体外的异源表达，为进一步揭示pscam的生理功能提供参考。【方法】克隆pscam基因的orf，推导其编码的氨基酸序列，采用生物信息学方法，分析扶桑绵粉蚧钙调蛋白的结构。构建pscam原核表达载体，将其转化到大肠杆菌中进行诱导表达，并对产物进行纯化。采用实时荧光pcr方法，分析该基因在扶桑绵粉蚧各个虫态中的相对表达量。【结果】扶桑绵粉蚧钙调蛋白基因的氨基酸序列分析结果显示，该蛋白没有信号肽，具有2个ef-hand钙结合结构域，有13个ca2+结合位点。成功构建了原核表达载体pet28a-pscam，经诱导表达后获得了重组的cam蛋白，目的蛋白的分子质量约为17ku。pscammrna在不同虫态的扶桑绵粉蚧中都有表达，在成熟雌虫中的表达量最低，在1龄幼虫中的表达量最高，是成熟雌虫的7.1倍。【结论】在原核表达系统中诱导表达了重组pscam蛋白；pscam基因在扶桑绵粉蚧不同虫态中差异表达。