lbd家族转录因子ttra2和atlbd37的表达与纯化

【目的】由于lbd基因编码一类植物特有的空间结构尚未解析的转录因子，拟建立2种lbd家族成员（ttra2和atlbd37）及其dna结合结构域的高效表达与纯化体系，为该家族转录因子的结晶研究奠定基础。【方法】以pet21a表达载体为基架，设计并构建了phmt载体，该载体在目标基因上游依次融合了his-tag、mbp和tev蛋白酶酶切位点。将ttra2和atlbd37基因的完整编码区及其dna结合结构域编码区分别插入phmt载体，获得重组质粒phmt-atlbd37、phmt-atlbd37-bd、phmt-ttra2、phmt-ttra2-bd。将上述质粒导入e.coli表达菌株2566诱导表达，先使用amylose亲和柱纯化获得融合蛋白，再用融合his-tag的tev蛋白酶切除融合蛋白ttra2-bd中的his6mbp双标签，使用ni-nta亲和层析柱去除tev蛋白酶和his6-mbp标签，最后获得目标蛋白。【结果】ttra2和atlbd37及其dna结合结构域均获得了高效可溶性融合表达，其表达量占细胞总蛋白的50%～70%；ttra2-bd经2步亲和纯化后，每升菌液可获得15mg纯度大于98%的目标蛋白。【结论】成功建立了2种lbd转录因子及其dna结合结构域的高效表达和纯化体系。